徠卡生物顯微鏡——透射電子像的分辨率
徠卡生物顯微鏡電鎊分辨率定義為電鏡可分辨樣品上兩點(或兩線)zui小距離。這是表示電鏡性能的一個重要指標(biāo)。
徠卡生物顯微鏡讓我們先來討論點分辨率。在散射吸收成像機制中,影響點分辨率的主要是電鏡各級透鏡的像差,它們使物樣上的每個幾何點都變成了有——定半徑的像斑。由*章已知,當(dāng)物樣的尺寸(f)逐級放大時,它所對應(yīng)的電子束有效孔徑角(。)卻遠級縮小。所以物鏡處的有效孔徑角、zui大,物樣尺寸r。zui小。從像差的成因得知,在幾種有重要影響的像差中,物鏡的球差和衍射差zui為重要,成為決定透射電鏡點分辨率的兩個因素。
徠卡生物顯微鏡在分辨率公式中習(xí)慣采用球差的zui小模糊圓表達式。又因為分辨率討論的是對物樣上的可分辨細節(jié),所以對像差我們都采用它們在物方空間中的相應(yīng)公式。球差用差同時存在時所形成的模糊因半徑。隨著分辨率減小,*項球差也減小,但第二項衍射差卻將加大。因此必然能找到一個折衷的*切鏡孔徑角qp,它使zui終的df值zui小。此zui小值(?。﹎m就是電鏡的理論分辨串極限6Ih。數(shù)學(xué)運算得出與此相應(yīng)的理論分辨率極限為不同學(xué)者在計算電子軌跡時作了一些不同假設(shè)率公式賂有不同,但主要差別只在前面的常系曾對特定的透鏡場和電子發(fā)射的角分布進行了計算。
徠卡生物顯微鏡在相位襯度的成像理論中,典型的方法是從單原子像出發(fā),針對*相位條件來推算點分辨率。*相位條件離不開球差(G)與離焦量(d/)的*組合以及*韌鏡孔徑角,表明兩種理論定出的點分辨率理論值是一致的。
在徠卡生物顯微鏡的高分辨率的領(lǐng)域中,測定點分辨串是極精細的工作。稍有閃失就會引起很大的誤差。近年來采用一種光學(xué)衍射圖的方法來代替直接測量細節(jié)的間距。將一張拍攝到的高分辨保(即其底片)放入光學(xué)衍射儀中轉(zhuǎn)換成一幅衍射圖。從衍射圖上離中心zui遠的清晰的衍射點,可推算出它所代表的樣品上的zui小細節(jié),也就是分辨率極限。是測定點分辨率的照片。樣品出碳膜上噴金微粒制成。圖中除其高分辨顯微像外,還有用光學(xué)衍射儀得出的衍射圖(左下角)。衍射固定出的電鏡點分辨率,促使數(shù)字圖像處理工作的開展。
上述光學(xué)衍射儀的功能可以用計算機來替代,具體說是用快速富里葉變換(F盯)來得到衍射圖.并直接從熒光屏上測定點分辨率。這樣,
徠卡生物顯微鏡目前對高分辨率電鏡的點分辨率測定已很方便和準(zhǔn)確。
徠卡生物顯微鏡在近代電鏡的性能指標(biāo)中,除點分辨率外往往還有一個線(或品格一Lan%e)分辨率值。這是研究晶體樣品時有用的分辨率標(biāo)準(zhǔn)。通常它的數(shù)值小于點分辨值。例如PhiliPs公司EM430電鏡的點分辨率為o.2nm,而線分辨率為o.14nm。因為二者是從術(shù)同條件下確定比的,而且從實測角度來看,品格條紋的襯度常優(yōu)于點間襯度,因此更容易分辨。圖像是在JEM一200cx電鏡上拍攝的金單品條紋像,其今zui小條紋間距o.14nm就是其線分辨率。