徠卡生物顯微鏡到目前為止，冰涼固定，冰凍超薄切片及冰凍干操是組織及細胞x線微區(qū)的常規(guī)方法。對該方法的細節(jié)做以下幾點說明。

徠卡生物顯微鏡這兩種細胞中電解質(zhì)的含量及分布十分不同。圓形心肌細胞中Na‘甚高而K’極低，線枝體中的ca”濃度十分高（250mm01／k8drywe炒t）。經(jīng)過與其它分析方法核對，證明圓形細胞高Na4低K’及線粒體內(nèi)高ca2’是由于在細胞分離過程中細胞膜受損傷的結(jié)果。細肋及組織的冰涼固定方法往往是先采取獰冷固定（quench一frMM），然后放入液氮中保存。淬冷固定對于保存的效果十分重要。活細胞或新鮮組織中富含水分，當淬冷時往往是紉胞或組織與碎冷劑（特別是用液氮粹冷時）直接接觸的部位先冷凍固定，因而形成。便妨礙了細胞的中心部位碎冷固定。因此在作x一線微區(qū)分析時，常常發(fā)現(xiàn)較大的細胞的中心部位有冰晶存在。為了防止這種情況發(fā)生，便使用熔點比液氮高但低干一806c的物質(zhì)作碎冷劑。這類物質(zhì)很多，但zui易獲得，價格員低廉的是濃態(tài)丙烷（沸點一42．120c，熔點一187．10c，分子量44．1），冷卻速度也zui快。但其缺點是易燃。具體操作如下，對固定單根肌纖維而言。

徠卡生物顯微鏡一個非常重要的問題是在取材和分離細胞過程表10一1大鼠胰腺外分泌部分經(jīng)過冰涼置換和樹脂包埋（Fs），冰凍干燥和樹脂包埋（FD）后冰凍超簿團片后，冰凍干燥（蠅）后細跑各部位65元素成分含量（均值L標準差mMd兒e）（引自R叨su88）中必須十分仔細，絕不能損傷待觀察分析的細胞。因為作x線微區(qū)分析不但步驟繁多，而且成本甚高，如果經(jīng)過長時間及多步騾的處理后，所分析的細胞是受損傷的細胞或死細胞，得出錯誤的結(jié)論是非常遺憾的。如經(jīng)過膠元酶處理分離出的心肌細胞有兩種形態(tài)，一種是長桿狀，排斥臺盼藍門種是圓形，月臺盼藍染色對著藍色。后者是在細胞分離過程中受損傷的瀕死細胞。

徠卡生物顯微鏡可將肌纖維放在一特制的架上，使該肌纖維收縮達到某時相需要固定時，立即啟動噴咀，使液態(tài)丙烷向肌纖維噴射，使之淬冷固定。然后再將肌纖維連同架子取出投入液氮中。如果固定血細胞或分離的細胞，首先低速離心使細胞集中，將細胞轉(zhuǎn)移到一個導熱性能良好的銀質(zhì)小管中、將該小管放入液態(tài)丙烷中獰冷固定。Hall實驗室固定大鼠胰腺時，先將兩鋼塊用液氦（或液氮）預冷，用鉗夾住兩銅塊將其放在胰腺前后，使姨腺淬冷固定。組織或細胞淬冷固定后轉(zhuǎn)移到液氮中可長期保存。

徠卡生物顯微鏡除目前zui推崇的冰凍超薄切片法外，在這里再介紹一種科學家們用過的沉積技術(shù)。在進行分析前加入一種物質(zhì)，使之與待分析的成份形成沉積物以固定它，然后分析該沉積物。例如，人們常用草酸鹽與焦銻酸鹽去沉積肌細胞中的ca2’。前者對胞漿中低濃度的ca”敏感性不夠高；焦銻吱鹽的敏感性高些，可與腦漿中游離ca2’形成電子致密的沉積物，但焦銻酸鹽與鈉、錳、鋇、鐵也形成沉積物，特異性較差。盡管如此．焦銻憨鹽與EGTA聯(lián)合應(yīng)用的組化反應(yīng)顯示腦內(nèi)cas‘效果是很好的。標本制備過程類似于普通透射電鏡超薄切片標本的制備，不同之處在于則osod固定前聞3％焦銻酸鉀（磷酸鹽緩沖液，pH7．6）固定6小時，在染色的肌肉超薄切片上，在每個肌節(jié)的A帶和2帶的中線可見黑色沉淀物、再用未染色的切片做X射線微區(qū)分析。人女I也曾用二氨基聯(lián)苯胺四鹽酸（DAB）去沉淀含血紅素的物質(zhì)等等。這種組化的沉淀反應(yīng)與x射線微區(qū)分橋聯(lián)合應(yīng)用在不具備冰凍超薄切片條件的實驗室可考慮采用。根據(jù)待分析元素的峰高可做半定量。

備注：徠卡生物顯微鏡關(guān)于組織塊的體積部分新聞由北京中儀光科科技發(fā)展有限公司編輯上傳。