徠卡激光掃描共聚焦顯微鏡

值孔徑的透鏡。此后不久，這項(xiàng)技術(shù)在醫(yī)學(xué)和生物學(xué)中得到應(yīng)用。

1979年，凱斯特（Koest曰）設(shè)計(jì)了一種徠卡共聚焦顯微鏡，為此他獲得了美國(guó)。198l年，維納恩茲•范•雷桑持（W加aed銘vanResnmt）*次成功地演示了用熒光探針標(biāo)記的生物材料的光學(xué)橫斷面，它標(biāo)記著所有的關(guān)鍵技術(shù)已經(jīng)成熟。同年，范德•威歐瑞特（vaa』erVoon）全面地描述徠卡激光掃描共聚焦顯微鏡。他認(rèn)為一套高質(zhì)量的重視日常激光掃描共聚焦顯微鏡必須包括：標(biāo)準(zhǔn)消像差和色差的光學(xué)透鏡、高靈敏度的探測(cè)器、產(chǎn)生特定波長(zhǎng)的功率不太小的激光器、高速度大容量的微機(jī)系統(tǒng)和掃描控制裝置。

早期的徠卡激光掃描共聚焦顯微鏡采用狹縫掃描，它的待點(diǎn)是掃捆速度較快，適合實(shí)時(shí)觀察動(dòng)態(tài)標(biāo)本。但是內(nèi)于顯微鏡的物鏡存在著軸外傷差，并且用狹縫掃描時(shí)在平行狹縫e1光軸平面亡沒(méi)有共聚焦原理，所以得到的共聚焦圖像的清晰度和質(zhì)量都受到影響。另外，由于一般徠卡顯微鏡存在著紫外色差、所以不可以用紫外光做為熒光激發(fā)的光源，但是由于

它的掃描速度快，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，價(jià)格便宜，所以還是有一定的使用價(jià)值。

為了克服早期徠卡共聚焦顯微鏡的缺點(diǎn)，后來(lái)的采用臺(tái)階掃描技術(shù)提高成像質(zhì)量。它的原理是掃描時(shí)光欄（用孔光欄代替狹纏）不動(dòng)，靠移動(dòng)工作臺(tái)讓物體一點(diǎn)一點(diǎn)被掃描，這樣成驚光束永遠(yuǎn)是軸上的、沒(méi)有軸外傷差。另外有些儀器上還加了滬紫外色差的切換裝此，這種儀器的圖像質(zhì)量相功能比以前有人的改進(jìn)。隨之而來(lái)的缺陷也很嚴(yán)重：婦報(bào)時(shí)必須把標(biāo)本固定死，以于使它的掃描速度比以前慢得多．所以方法實(shí)時(shí)地觀察活標(biāo)本。

在使用較多的是光束掃描器，即驅(qū)動(dòng)激光束扛描標(biāo)本。它具安足夠伙的速度，可滿足共聚焦系統(tǒng)的要求。光束列描器包括：?jiǎn)喂馐⒍啵﹖束、狹縫扣擬器。單光束們描器性能．狹繼掏描器雖具有產(chǎn)生圖像的zui高速度．但是與單點(diǎn)掃描器帕比，信噪比較低，這

是由J；從散焦區(qū)來(lái)的沒(méi)肘光不能被有效的檔住．另外在其分辨率本領(lǐng)廠有內(nèi)部的不平衡性。多光束掃描器由電動(dòng)馬達(dá)帶動(dòng)N1pk‘’v盤旋轉(zhuǎn)而完成。

從發(fā)展過(guò)程來(lái)看．成像質(zhì)量與掃描速度始終是相互矛盾的。各廠家在此方面曾想盡辦法努力解決，比如MerEd，an公司推出成鐐質(zhì)垃較高的U比ma如激光掃描共聚焦顯微鏡祁掃描速度zui快的In，Ight型激光掃描共聚焦顯微鏡，而Nikon公向則利用自家光學(xué)設(shè)計(jì)的優(yōu)勢(shì)．研制出產(chǎn)品“水鏡”來(lái)代替以柞的物鏡，取得較好的結(jié)果。公司*家推出共聚焦物鏡CN．ANAP（）CHIMAT40x／1．2w*zui近又推出C—PI‘ANAP（）63X／1．2w水鏡，該水鏡有一調(diào)節(jié)環(huán)，可修正閻水浸活休的不同深度所帶來(lái)的球差，其紫外通過(guò)率南，大大提高了成像質(zhì)量。zeM公司也是世界r1*家奉公司白行設(shè)計(jì)的“體視激光掃描共聚焦顯微鏡，使系統(tǒng)性能達(dá)到高度的協(xié)調(diào)同一。N。—Red公司傘產(chǎn)的激光扣描共聚焦顯微鏡，出于其產(chǎn)品價(jià)廉物美．目前在世界上占有率較高。

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